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線粒體膜電位

簡要描述:

在細胞凋亡的過程中往往伴隨著線粒體跨膜電位的破壞,這被廣泛認為是細胞凋亡過程中早發生的事件之一。線粒體膜電位檢測的有很多方法,JC-1的流式檢測是比較常見的一種方法。

更新時間:2020-04-13

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一、服務介紹

 大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關,其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中早發生的事件之一。它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。

 

二、實驗原理

 JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時,主要以單體形式存在,激發波長為527nm,呈綠色熒光;當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,形成聚合物,發出紅色的熒光,激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內釋放,紅光強度減弱,以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光,根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。

 

三、實驗流程

1. 細胞培養;

2. 用適當的方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性依照組合陽性對照組,收集細胞;

3. 用PBS洗滌細胞三次,收集不多于1×106的細胞;

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×Incubation Buffer,混勻并預熱至37℃;

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液;

6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮,37℃,5% CO2的培養箱中孵育15~20min。

7. 室溫離心(2000rpm,5min)收集細胞,用1×Incubation Buffer洗兩次;

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞;

9. 流式細胞儀檢測,分析。

 

四、客戶提供

細胞株(凍存株或培養好的細胞),相關藥品或MMP檢測試劑盒(可代購)!

 

五、公司提供

實驗步驟、結果圖、數據結果和分析報告

實驗周期:1-2周,具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。

 

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