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原位雜交

簡要描述:

原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。

更新時間:2020-04-17

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原位雜交(in situ hybridization)將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

 

原位雜交實驗步驟:前期胚胎的制備。

原位雜交**天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。

原位雜交第二天進行 1 將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。3置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。4置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。5用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。  7  按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連抗體,4C 冰箱過夜。

原位雜交第三天進行1) 用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mlMABT置換,25分鐘,再用1mlMABT溶液置換,一小時以上,后用1mlMABT溶液置換,25分鐘。2) 用1ml 1mM米睉的Staining buffer洗三次,每次放置五分鐘。3)將胚胎轉入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM米唑),十六孔板外面包上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出,用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定,拍照。6)4C冰箱保存。

 

原位雜交服務內容:①細胞特異性mRNA轉錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究;

                   ②感染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、巨細胞病毒DNA的檢測;

                   ③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測;

                   ④基因在染色體上的定位;

                   ⑤檢測染色體的變化,如染色體數量異常和染色體易位等;

                   ⑥分裂間期細胞遺傳學的研究,如遺傳病的產前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫瘤的診斷和生物學劑量測定等。

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