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細胞JC-1染色實驗

簡要描述:

細胞JC-1染色實驗是基爾頓生物的基礎服務項目之一,由經驗豐富的實驗人員操作完成。

更新時間:2020-09-21

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JC-1染色JC-1是一種陽離子染料,可以在線粒體內聚集,低濃度時主要以單體(monomer)存在,發射光以綠光(~525nm)為主;而在高濃度時則可以形成多聚體(aggregation),發射光以紅光(-590nm)為主。線粒體本身存在-定的極性(polarization),其外膜為負極,內膜為正極。電位差由Ca2+、Na和H流調控。當線粒體狀態良好時對JC-1攝取量少,因而在線粒體內主要以單體的形式存在綠光強度紅光強度的比值較高。在線粒體發生去極化(depolarization)時,線粒內JC-1的濃度較高,多以多聚體的形式存在,綠光強度/紅光強度的比值降低。JC-1染色的綠光強度/紅光強度僅取決于線粒體的膜電勢(membranepotential),而與線粒體的形態、體積和密度都無關,因而能更好地反映線粒體的功能狀態。由于凋亡發生的早期存在線粒體的去極性,因此,JC-1 染色被用于檢測調亡的早期發
生。其實驗方法如下。
JC-1染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(1 ~ 5mg/ml),儲存于-20C,用時以培養液稀釋至10ug/ml 終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養液,漂洗細胞后直接加入染色液,10-30min 后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。線粒體狀態好時細胞以綠色為主,當紅光信號增強時,紅綠相疊,以橙色為主。該染色運用于懸浮細胞時還可以通過流式細胞儀進行檢測,收集紅/綠
信號強度,計算其強度比。

 

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